遇秀玲：中国农业大学兽医病理学博士，曾任军事医学科学院实验动物中心副研究员，中国动物疫病预防控制中心病理室主任，长期从事实验动物病理检测研究工作。
问题一：为什么蓝耳病在许多场，经常是免疫或不免疫都有发病很严重，带来很大损失？
我想不光是蓝耳病，在我国猪病都有一个共性问题，就是诊断的问题。很多猪场发病在临床现场一看就诊断，或实验室一检出蓝耳病毒就诊断为蓝耳病了。这里要强调的是：蓝耳病毒的检出 ≠ 蓝耳病的存在。
病是一个因病原造成临床影响的过程，而病原可以是潜伏在体内，呈持续带毒状态，未见得一定有临床问题。另一方面，蓝耳病现在大部分用活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的时间内都是可检出的，所以检出的病毒如果不做鉴别检验，可能会造成临床上的误诊。
问题二：临床上很多猪群检出蓝耳病毒已经是常态，那么如何判断这个猪场因为蓝耳病毒的存在造成了疫情呢？
第一，在最近没有免疫的情况下，使用双份血清的评价方式。
即猪场一直在持续监测的状态下，当感到临床不稳定时采血检测，和原来监测时的检测结果对比。如果不稳定时血清PRRSV抗体值突然升高，一下子有较大的变化，可以考虑是蓝耳病毒带来的影响。
第二，在一个场疫情的早期，对早期有代表性的发病猪及时剖检、采样送实验室进行检测诊断。
如果不是在疫情早期采样，或者已经采用了各种方法治疗一段时间后再去做检测，可能得出的诊断结论就会是多种病原混合感染，而不是这次疫情的病原。可能现实中多数情况是，这个发病群等到检测结果出来了再去采取措施控制已经来不及了。其实可以在发病初期在采样检测同时根据临床判断采取控制措施。这样等诊断结果出来了，就算之前的判断错误，也可以证实本次发病的原因是什么，对今后的疫情防控也是有指导意义的。
问题三
蓝耳病检测采样的靶组织和靶器官应该是哪些呢？
对蓝耳病来说血样是很好的靶样品，另外我们应该对发病过程中临床上有代表性的猪只进行剖检，采取病毒检出率高的靶组织（蓝耳病毒除了血液，扁桃体和肺是最重要的靶器官外，在肺门淋巴结和下颌淋巴结也可以检出）。
作为蓝耳病毒，其最重要的靶组织就是扁桃体和肺脏，血液作为最容易采集的样品，在蓝耳病的检出中意义也是非常大的。血液中病毒检出时间较早，一般感染后3天左右就能从血液中检出，同时持续的时间也非常长，可以达到2-3个月，所以作为活体检测，血是最好的。作为死亡剖检动物来说，扁桃体和肺脏是最重要的靶器官。
问题四
关于蓝耳病如何做鉴别诊断，耳朵发蓝就一定是蓝耳病吗？在实验室检测上如何区分高蓝和经典毒株？
并不是耳朵发蓝一定是蓝耳病，末梢循环障碍时耳朵都会发蓝。
蓝耳病有一个典型的症状，就是眼结膜炎，开始可能是浆液性的，后面可能会发展成粘液性的。高致病性蓝耳病时20-40%的猪有神经症状，因为蓝耳病毒在后期会进入到脑组织中，造成一些神经症状，可以看到运动障碍、抽搐、后躯麻痹等。扁桃体出血、溃疡，肺组织实变。在败血症时可看到脾脏肿大淤血、梗死灶，但是这种肿大与猪瘟以及一些细菌性疾病时我们看到的脾肿是有区别的，除非后续继发细菌感染，单一病毒造成的损伤是不太容易看到那种脾脏极度肿大的。
临床上近年来在PRRSV鉴别检验这块要做的工作很多。我们检测蓝耳病毒所用的PCR方法可能是各种各样的，有些可能直奔高致病蓝耳病毒的检测去了，有些可能检测的是经典蓝耳。事实上，在所有的病原检测方法里，没有所谓针对经典蓝耳病毒的，只有蓝耳病毒通用的RT-PCR。因为蓝耳病毒通用检测方法是针对蓝耳病毒最保守的片段设计的引物，而引物不同灵敏度也不同，作为蓝耳病毒的检测方法来说，使用最保守片段引物是最灵敏的，我们用的通检RT-PCR就是这样的方法。
比如使用通检的RT-PCR方法检出十个样品里面有八个阳性，而用检变异株RT-PCR方法（引物），十个里面检出六个原来阳性较强的样品。不是说漏掉的那两个弱阳性就是经典株，是因为两种方法的灵敏度不同造成那两个弱阳性样本就没有被检出，假如送去测序它们有可能都是变异株。所以说使用通检RT-PCR方法只能告诉你检出来是蓝耳病毒阳性，而不能确定是哪个毒株。而接下来再用检变异株的RT-PCR方法检显示一部分阳性一部分阴性，是因为后一种方法灵敏度比通检的方法低，原来强阳性的现在检出是阳，弱阳性的检出就是阴了，而不能说那一部分变为阴性的就是经典株。
有些场检出蓝耳既有高致病的也有经典的，有可能是因为检测方法灵敏度不同造成的对检测结果的理解误区。在通检阳性的结果下，需要再做鉴别检验才能告诉你这个毒株是什么类型。
问题五
蓝耳病与临床症状相似的疾病如何做鉴别诊断？
对临床症状相似或相同的病做鉴别诊断，这点非常重要。有些场在临床诊断上，把其他疾病引发的症状归结到蓝耳病上。比如2012年在伪狂犬流行毒株造成的猪伪狂犬爆发场，发病猪肉眼看到与高致病性蓝耳病相似的肺实变，但是做成组织切片就发现，情况大相径庭。病猪肺脏在组织学上看到的是坏死灶，这是伪狂犬的典型病变，因为伪狂犬病就是以灶性坏死为组织学特点。但是蓝耳病毒主要在肺泡2型细胞和巨噬细胞增殖，肺组织除了间质性肺炎没有其他变化。之后在肺免疫组化染色中检出的是伪狂犬病毒而没有蓝耳病毒。这些临床表现相似的疾病在组织学中可以清晰的做区分。
问题六
现在在蓝耳病毒的检测中还需要区别野毒和疫苗毒，那么猪场如何去区分是野毒感染还是疫苗毒，以及如何评价打苗以后的结果？怎么去做检测？
实际上蓝耳病毒的抗体检测方法有很多，但是对现在大规模样品检测来说，ELISA是一个相对方便能够在临床上推广应用的方法。ELISA方法有很多商品化试剂盒，在国内用的最多的是两类。一类是N蛋白包被的试剂盒，一类是糖蛋白包被的试剂盒。那么这两类试剂盒的蛋白包被是一个什么关系呢？与病毒免疫原性相关性更好的是膜上的糖蛋白，而病毒感染首先激发的是跟核酸相关的N蛋白。
那么在临床下什么情况下该选什么蛋白包被的试剂盒呢？N蛋白激发抗体产生时间很早，如果是一个没有感染过蓝耳病的地区或场，一定是用N蛋白来做防控预警。还有就是做双份抗体的检测，一旦出现N蛋白抗体在没有免疫的情况下出现一个跳升，一定和蓝耳病毒感染发病相关性很大。
而作为疫苗的免疫效果的，则与糖蛋白相关性大，N蛋白产生的抗体只代表是不是有感染，与中和抗体及攻毒保护结果相关性不大。N蛋白抗体出现早，但是持续时间相对短，且与免疫保护相关性较小。糖蛋白抗体产生时间晚，且持续时间长，与免疫保护相关性更好，所以通常用它来做免疫后抗体水平监测，监测猪群是否处在保护状态。
PRRSV主要蛋白的作用
注：使用上述不同蛋白作为包被抗原的ELISA试剂盒，在临床上可用于不同免疫和感染背景的猪群。
