规模化猪场对类NADC30株的诊断与防控

蓝耳病病毒（PRRSV）自1996年传入中国，10年后曾变异产生高致病性毒株(HP-PRRSV)造成过重大危害，HP-PRRSV的遗传学特点、病毒的致病力、疫苗研制以及病原检测方法等多个方面取得了较大成果，2012年后NADC30-LikePRRSV毒株分别在河南、福建、山东、广西、东北地区陆续被发现，说明NADC30-LikePRRSV株是由NADC30传播演化而来，多个地区都有分离结果的报导，也预示着该毒株有成为国内新的优势毒株的潜力。本文根据山西地区某规模化猪场对NADC30-LikePRRSV的诊断方法、防控过程，总结了对该毒株防控工作的一些经验和教训，供大家参考。

1病例概述

该场存栏二元基础母猪1800头，主要对外提供体重15kg左右的商品苗猪。 2016年12月22号开始使用HuN4-F112株疫苗，由“每年2/6/10月的种猪普免”更改为“母猪产后14天1头份/头跟胎免疫”，此前半年内使用过AtccVR2332、CH-R1、R98株多种疫苗。

1.1 临床表现

2017年1月4号左右，发现妊娠母猪体表寄生虫较多，耳朵内侧有黑色污垢，仔细观察才确定母猪普遍背腹部、耳尖有针尖状出血点，皮毛杂乱、无光泽，部分母猪眼角分泌物增多，便秘母猪比例上升，体温测量39.0-39.7 ℃。

2017年1月11、12号妊娠舍2、3、4、5栋按照技术部制定的免疫程序，普免了猪瘟、圆环疫苗各2头份。随后病情加重，2017年1月13号4、5栋妊娠母猪开始发生流产，母猪的流产主要集中在妊娠80日龄中后期阶段（图1）。另外，2017年1月23号分娩舍出现零星妊娠105-107d早产，排出不足月的活胎儿或死胎，活胎生命力较弱，基本上两天内就会死亡。正常产的死胎较多。母猪普遍体温升高，可达到41℃，卧地不食（表1）。保育猪未表现出PRRS严重症状。临床初步判定为PRRSV感染症状。

图1.流产及早产胎儿

表1，1月下半旬妊娠母猪发病情况统计，S为妊娠舍，F为分娩舍

1.2 处理措施

1.2.1

紧急采集4份胎儿、10份血样，第一时间送至华南一动物疫病诊断中心去化验、确诊。

1.2.2 综合防控：

1）加强和完善猪场内部生物安全措施，人员进出猪舍进一步加强消毒和隔离，禁止生产区人员串舍。

2）封群管理，做好已引进后备母猪的隔离和驯化，近期内不再从外部引种。产房和保育做到全进全出，杜绝外来人员进入参观。

3）健全消毒措施，每天勤换消毒盆，加大每周猪舍消毒力度；病死猪焚烧或者深埋处理。

1.2.3

加强饲养管理和猪舍环境控制，减少应激，注意平时的室温、湿度和通风，漏缝地板下的水泡粪及时排除，减少室内有害气体的含量，包括氨气、硫化氢、碳氧气体等。

1.2.4

猪群药物预防与保健。提高猪群抵抗力，防止继发感染。

1）药物保健：基础母猪饲料中添微生态制剂2 Kg、爱乐新800g、艾农1 Kg/T，连续一个月。

2）药物治疗：针对发热超过40℃妊娠母猪及时注射抗生素、解热镇痛药和黄体酮，争取先把母猪体温降下来；针对有分娩预兆的母猪，肌注黄体酮，目的让其保胎，增加妊娠天数，尽量减少早产比例；针对妊娠母猪体表寄生虫问题，喷洒有效浓度的特敌克溶液。

1.2.5 免疫调整防控

发病种猪群暂时停止普免工作，等检测出病原序列后再制定后期免疫程序，生长猪按原先免疫方案进行。

2 结果

2.1采样化验报告

送检的2份胎儿呈弱阳性，4份血清呈弱阳性，1份血清呈强阳性。因为病原未检测到猪瘟、圆环、伪狂犬（表2，3），所以仅围绕蓝耳病毒的结果进行报告。

表2 病原检测方法及标准

表3 病原学检测报告单 说明：“+”表示病原感染阳性；“-”表示病原感染阴性。

2.2 病原检测电泳实验

PRRSV检测方法及判断标准：通过扩增 Nsp2基因上覆盖片段缺失的区域来区别经典型PRRSV和变异型PRRSV。如果样品中有变异型PRRSV存在，将能够扩增出 418bp 的片段。如果样品中有经典型PRRSV存在，则能够扩增出 508bp的片段。如果样品中两种亚型的PRRSV均存在则可以同时扩增出大小分别为 418bp和 508bp的片段（图2，表4）。

图2 PRRS电泳图片

表4 PRRS电泳结果

2.3 山西猪场样品中PRRSV ORF5基因测序

基因测序结果：ATGTTGGGGAAATGCTTGACCGCGGGTTACTGCTCGCAATTGCCTTTTTTGTGGTATATCGTGCCATTCTGTTTTGCTGTGCTCGTCAACGCCAACAGCAACAGCAGCTCCCATTTACAGTTGATTTATAACCTGACGATATGTGAGCTGAATGGCACAAAGTGGCTGGAAAAAAACAATTTTGACTGGGCTGTAGAGACTTTCGTTATTTTTCCTGTGCTCACTCATATTGTCTCTTACGGCGCCCTCACCACTAGCCATTTTCTTGACACGGTCGGCCTGATCACTGTGTCCACCGCCGGATATTATCACGGGCGGTATGTGTTGAGTAGCATCTACGCTGTCTGTGCCCTGGCTGCGTTGGTTTGCTTCGCCATTAGGTTGGCGAAAAATTGCATGTCCTGGCGCCTACTCTTGA

2.4 山西场毒株与常见毒株的双序列比对结果

该场的毒株变异较大。R98、VR2332、CH1-R、CH1-a是经典毒株的代表，其中VR2332是美国经典毒株的疫苗毒株，CH1-R是国内的经典蓝耳疫苗毒株。GD2008、GD-ZQ-2014是广东毒株。TJ-M 是天津毒株的疫苗毒株。JXA1-R，HUN4-F112，TJ-M毒株是变异毒株的代表。NADC30是美国最新的流行毒株。HB-1/3.9是介于经典毒株和变异毒株之间的一种蓝耳毒株（表5）。

表5山西猪场毒株与常见毒株的同源性比对结果

2.5 山西场毒株基因进化树报告（图3）

图3 山西猪场样品的PRRSV ORF5基因的进化树

2.6 确定以后健康母猪免疫方案

持续使用HuN4-F112株疫苗，母猪产后14天1头份/头跟胎免疫。

2.7 猪场疫情恢复情况

经过养殖人员的努力，妊娠舍3月初开始好转，分娩舍在2、3、4月死木畸比例分别为11.16%、17.28%、21.39%，尤其是死胎比例高，到5月初才开始好转。四个月后该场各项繁殖生产指标基本正常，基本恢复至发病前的生产水平。

表6 山西猪场采取各种防控措施后的生产恢复数据，

3 讨论

3.1 山西场NADC30-LikePRRSV毒株爆发的原因分析。

3.1.1 猪场生物安全工作存在漏洞。

2017年春节假期期间，猪场人流、物流、车流较大，门卫消毒程序、消毒液配比质量、隔离等环节缺少有效监督和落实，未能有效地控制传染病的传入；由于假期期间值班人员较少，造成人员串舍轮岗的现象频繁，增加了PRRSV在猪场内交叉传播的危险；PRRSV有直接或间接接触传播、空气传播等多传播途径，使得该病毒进入猪场可能性增大。

3.1.2

山西猪场疫苗毒株变动频繁，免疫程序繁琐，PRRSV毒株容易变异，不同毒株之间容易发生重组。

PRRSV是一类属于尼多病毒目（Nidovirales），动脉炎病毒科（Arteriviridae），动脉炎病毒属（Arteriviridae）的单股正链的RNA病毒，具有特征性的套式转录/翻译策略。成员之间有相似的基因组结构和遗传要素，但是在宿主特异性，疫病表型，病毒粒子形态，基因组大小，编码内容和细胞嗜性等方面有较大差异。这些基因型不断变异的结果就是产生了大量具有不同致病性的毒株，同时给PRRSV的防控也带来了很多不稳定因素。而在突变和重组的过程中便为强毒株的产生孕育了基础。

该病毒以RNA作为遗传物质，单链的结构使得病毒的基因组十分不稳定，极易发生突变和重组，有相当活跃的变异行为，引起这种现象的原因可能与RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）缺乏校正机制有关，也可能与PRRSV频繁的发生重组有关。免疫程序繁琐且疫苗种类常换，使得发生PRRSV变异毒株成为可能。

不同疫苗产生的亚中和剂量PRRSV抗体，不仅不能对感染的PRRSV产生抑制效果，反而能促进PRRSV的复制和增殖，这种现象称为抗体依赖性的增强作用（antibodydependent enhancement，ADE）。如果一个猪场的猪群因为疫苗乱用等因素，导致PRRSV疫苗达不到预期的免疫效果，那么就会在PRRSV入侵时由于ADE的存在而加剧疫病的感染。

3.1.3

各种不良刺激因素的应激对母猪带来了危害，主要包括疫苗注射应激、环境应激等。

山西猪场因为环保压力以及保温防冻的掣肘，水泡粪没有及时清除，只考虑保温而不能及时通风，造成室内有害气体浓度较大，猪舍内的母猪普遍有眼角分泌物增多的，饲养员在室内都有刺鼻、眼结膜发痒的反应。加强猪舍环境控制，注意平时的室温湿度和通风，减少室内有害气体的含量，是保证猪只正常生长的前提。

1月份直接的两种疫苗普免肌注应激可能使本身免疫抵抗力低下的猪群突然发病。避免疫苗因素对母猪群的应激，可以提前3d大群饲喂VC、微量元素等抗应激药物，这样不仅可以延缓疫苗应激，还可以增强疫苗的免疫效果。

3.1.4

山西场2016年12月从外场引过一批150头后备母猪，引入猪场后隔离、驯化工作不到位。

现代规模化猪场在扩群工作方面，尽量要求是做到自繁自养，或者要慎重引种、少频率引种，进场后一定要做好隔离、驯化工作。自繁自养不仅可以保证延长猪群的健康稳定性，更重要的是其可以有效的避免外部PRRSV毒株进入养殖场，在猪群中扩散、变异或重组。驯化的目的就是在不能对猪群PRRSV净化的现况下，控制PRRSV在猪群中稳定存在，对其不清除，也不使其爆发。驯化手段包括商业疫苗、本场分离毒株统一感染和抑制PRRSV毒血症的排毒等。

从外部引入后备种猪的场，应该严格制定并按照引种操作规范流程进行。隔离、驯化期至少6周。隔离舍采取“全进全出”管理方式，距原有猪群至少应有100米，足够远的距离通常更有利于减少潜在病原通过空气传播的危险。理想的驯化程序也应在隔离舍进行，如果把高度健康的后备母猪和公猪，直接饲养在一个有病原存在且病原活跃的猪群中，引进的种猪就会出现严重的健康问题，甚至表现出严重的疾病。后备母猪驯化措施包括：免疫、药物添加；与原场猪或原场猪的粪便、木乃伊等接触；将原猪群中母猪因患产道疾病的母猪与新引进的种猪混群饲养1-2周。

3.2 本场妊娠母猪出现早产而不是流产现象的分析。

一般在行业内母猪的流产是指妊娠期内110d内发生的，是指由于胎儿或母体异常而导致妊娠的生理过程发生障碍，从而导致妊娠中断。早产一般是指妊娠2-7天发生的分娩。

PRRSV一般引起后期母猪流产的报道较多，而且该病毒对妊娠中断的机理来看，应该是引起流产。本案例现的大比例早产，一是可能是繁殖区人员的对配种日期记录和预产期推算的错误，二是临产母猪是在围产期就感染了PRRSV，从而引起早产，而不是在妊娠期感染引起流产。三是该NADC30-LikePRRSV致病机理的改变，造成该毒株的容易引起早产，这种推断还需后期国内外相同毒株的临床报告，以及毒株分子致病毒力试验的证明。

3.3 本案例猪群防控结果因时间关系的评价标准不够详细，缺少必要的猪群康复指标，比如猪群抗体水平指标情况。

该病例从2017年1月13日开始，大群临床症状好转从2月中旬开始，各种化验报告到4月24号才完全得出结果。以后的母猪彻底清净工作需要大量的时间和数据，目前阶段性的结果，只能从母猪群的繁殖性能指标着手，比如说配种分娩率、死胎率、死木畸比例、产房成活率等。针对NADC30-Like PRRSV的影响，猪群后期的血清抗体ELISA数据，需要以后的3个月才能拿到，目前缺少直观的实验室数据。

3.4 PRRS猪场发病期间药物治疗的选择。

PRRSV的感染会引起机体产生免疫抑制，这样就给其他病毒性疾病或细菌性疾病的感染创造了机会，多种病原的混合感染通常会导致更严重的临床症状，应及时给发病猪只添加必须的微量元素和抗生素。发病猪群整体使用干扰素或中草药、微生态制剂可以提高猪只机体免疫力，从而在一定程度上保护了易感动物，减轻临产症状。猪场不要轻易更换疫苗毒株，否则会很容易使潜伏期的病毒发病更严重或者引起ADE现象，加重疫情。

参考文献（略）

作者简介:尹训强(1987-),男,兽医硕士,主要从事猪业生产管理及兽医疾病诊疗与防控，Email:849165892@qq.com.

通信作者:施增斌(1970-)，男，高级执业兽医师，主要从事养殖集团事业部经营管理和生产技术监督，Email:83736981@qq.com