鼻腔是猪群感染病毒或排毒的主要途径之一,无论在自然感染或者人工造病的条件下,猪群都可以通过鼻腔带毒和排毒。病毒感染的早期诊断对于猪群疫病的控制至关重要,因此开展科学、准确及可执行的监测方案势在必行。
ASF病毒感染途径的研究发现,鼻腔拭子的检测比血液或其他采样方法更早出现,同时也具有易采集、可操作性强、对猪群应激较小等优点,从而成为临床首选。本文参考文献报道结合临床实际情况,对鼻腔拭子采样做一介绍:
第一步
准备鼻拭子采样材料:保存缓冲液、封口胶带、一次性注射器、一次性无菌拭子、记号笔。
第二步
保定猪只,将无菌棉拭子深插入猪只鼻腔内,旋转三次,将拭子放入保存管中,记录猪只信息。
第三步
用无菌注射器注入2ml拭子保存缓冲液,封口,垂直放置,冷藏保存,48h内尽快送检。
鼻拭子采样视频教程:
猪场内环境的样品采集涉及到固体和液体环境,结合生产实际情况,对猪场内环境样本采集做一介绍:
一、固体环境采样教程
步骤一、
准备采样材料:保存缓冲液、封口胶带、一次性注射器、一次性无菌拭子、记号笔。
步骤二、
用无菌注射器向拭管注入2ml保存缓冲液,先浸润无菌棉拭子。
步骤三、
固体环境采样点表面呈井字采样(详见视频),将拭子放入拭管中,记录采样信息;封口,垂直放置,冷藏保存,48h内尽快送检。
二、液体环境采样教程
步骤一、
准备采样材料:无菌离心管、一次性无菌吸头、保存缓冲液、封口胶带、一次性注射器、记号笔。
步骤二、
用无菌注射器向离心管注入4ml保存缓冲液。
步骤三、
用无菌吸头吸取采样点液体1ml置于离心管中(详见视频)。封口,记录采样信息,冷藏保存,48h内尽快送检。
三、猪场内环境建议采样点
猪场内环境涉及的点和面非常多,以下建议采样点涉及的主要是常见污染区域或者需关注的采样点,供养殖场参考。
1、物资消毒间:物资消毒架、物资进口区域门把手、脚踏区域;
2、人员消毒通道:门把手、入口处脚踏区域;
3、兽药房:药房门把手、药房冰箱门把;
4、工作服:刮取污染的工作服上污染物;
5、雨鞋:刮取雨鞋侧面及鞋底的污染物;
6、内部转运车辆:轮胎、货仓、司机室、脚踏、方向盘、油门及刹车部位;
7、内部运输斗车:轮胎、手推把手;
8、饲料加工成品仓出料口:出料口、环境样品、饲料袋;
9、猪场内门把手:猪舍及兽医室等建筑门把手;
10、道路:猪场内道路、猪舍内道路。
以上监测建议频率为一周一次,各养殖场可根据当地疫情压力调整监测频率。
猪场内环境采样
出猪台是猪场与外界车辆直接接触的部位,如果外面售猪车辆洗消不到位,猪场员工装猪时,又没有严格遵循严格的脏净分离原则,直接将场内的猪赶到拉猪车上,就很容易将洗消不彻底的拉猪车上的病毒(包括ASFv、FMDv、PEDv等)带入生产区,从而使猪场染上新的疫病,这也是目前猪场最容易出现问题的环节。据调查了解,ASFv通过离猪场很近的装猪台感染机率有85%的机会。
目前疫情紧张,在猪场外建独立的售猪中转站(或转运中心),来避免ASFv的感染是最实用的办法之一,可以有效的缓冲疫情的威胁。转运中心可以很好避免场内工作人员与外界拉猪车辆接触,人员即使接触也是场内的周转车,而场内的周转车辆是严格按要求做好洗消烘干工作再来装猪的,相对来讲全场的生物安全就有了保障,因此转运中心现在变成了规模猪场的必要设施。
转运中心的建设,是猪场生物安全的重要一部分,而转运中心的环境是否安全关乎猪场疫病是否发生,有案例报道,一养殖场在转运中心监测到相关的病原菌,因洗消工作执行不到位,20天后该病原菌传播到猪场。可见转运中心的洗消工作和环境安全预警的重要性,洗消工作可采用低压冲洗、清洁剂打湿浸泡、热水高压清洗、晾干、消毒、烘干等步骤执行,环境安全预警可定期通过实验室(按照相关部门规定执行)监测环境评估。
转运中心环境监测包括:外部污区、转运灰区及内部净区三个部分,本文结合实际情况,对转运中心环境采样做如下预案:
一、转运中心采样建议
一、采样区域
按划分的三个区域进行采样,包括:外部污区、转运灰区、内部净区。
二、采样示意图
1.外部污区
选择污区的2个区域,如图所示。选择区域1的左上角、右下角采样,选择区域2的左下角、右上角采样。
2.转运灰区
选择灰区的2个区域,如图所示。选择区域3的左上角、右下角采样,选择区域4的左下角、右上角采样。
3.内部净区
选择灰区的2个区域,如图所示。选择区域5的左上角、右下角采样,选择区域6的左下角、右上角采样。
二、采样示对象及方法
1.采样对象:
所选采集区域的固体表面、或者环境液体。
2.采样方法:
采用专用动物病毒采样管套装,按净区→灰区→污区顺序采样。
(1)固体表面:使用棉拭子采样,采用“井”字形法采样后放入保存管中。
(2)液体环境:吸取环境中的液体0.5-1ml,放入保存管中。
3.现场监测人员要依照规范进行操作,做好现场记录。
以上监测频率为一周一次,各转运中心可根据当地疫情压力调整监测频率。
转运中心采样视频
在当前非洲猪瘟疫情严峻形势下,猪场需加强生物安全体系建设,切断病原传播链条。运猪车辆在猪场与猪场之间、猪场与屠宰场之间、猪场与饲料厂之间交叉运输的情况很常见,带来病毒交叉传播风险。
对于猪场来说,猪只和饲料的进出都是无法避免的,而负责运输的载体——车辆,是当前交叉污染最突出的问题。被外部污染的车辆与猪场的接触、流通是病毒从猪场外部进入内部的主要途径之一。因此,提高猪场的“运输安全系数”,使用彻底清洗、消毒和烘干的车辆非常重要。
洗消房是洗消中心的第一道防线,车辆经过彻底清洁后,车辆、洗消房内部区域环境及洗消污水的污染与否,直接反映洗消中心的安全系数。同时,当前建立的洗消中心多为区域性共用,洗消中心的安全系数关乎是否造成运输车辆的二次污染,是否增加区域内猪场的安全风险。
洗消房的环境监测涉及到车辆、内部区域环境及污水三个部分,根据文献结合实际情况,对洗消中心-洗消房采样做一建议:
一、车辆采样建议
一、采样清单
二、采样示意图
(1)示意①
(2)示意②
(3)示意③
(4)示意④
二、洗消房-内部区域环境采样建议
一、采样区域选择
原则:所选择的采样区域要具有一定的覆盖面,越大越好。
建议:取前、中、后三个区域,具有覆盖面,并贴合实际。
二、采样示意图
建议选择3个区域进行采样,如图所示,包括:进入洗消间区域A、污水道表面区域B、洗消间区域C。
区域A:选择区域A的左上角、右下角采样。
区域B:选择区域B的左下角、右上角采样。
区域C:选择区域C的左上角、右下角采样。
三、洗消中心污水采样建议
一、采样建议
选择污水道积水区域分3个点(前、中、后)采集积水。
二、采样示意图
以上监测建议频率为一周一次,各洗消中心可根据当地疫情压力调整监测评率。