猪场在做抗体检测时,往往会得到一个S/P值。什么是S/P值?S/P值是酶联免疫吸附检测的一种结果报告形式。这里先简单介绍一下什么是酶联免疫吸附试验。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
检测抗体的方法有很多,酶联免疫吸附试验是最常用的。酶联免疫吸附法检测抗体的基本原理是:
先在反应容器的表面(微孔板)附着上需要检测的抗体的特异性抗原,用来捕获受测样本中的抗体。把受测样本注入微孔后,样本中的抗体就会被之前加入的抗原捕获在容器表面。
冲洗掉其他东西,剩下的就是没用完的抗原和捕获了抗体的抗原。这个时候当然不能直接去数有多少个抗体,因为抗体太小了,是一个很弱的检测信号,需要把这个信号放大。而酶就是那个信号放大器。
把酶连接在所测抗体的抗体上(抗抗体)构成酶标抗体,把酶标抗体加入刚才的反应容器,同样的原理,酶标抗体会被抗体捕获。没被捕获的酶标抗体也会被冲洗掉。这个时候再加入显色液,显色液在酶的作用下会变色,被捕获的酶标抗体越多,颜色越深。通过这种方法间接的实现了对抗体的有无和多少进行了显示。
此时可以用肉眼直接观察,但是如果要精确测量就需要用到一个比色计(酶标仪)。比色计的原理是向样品孔中照射特定波长的光,测量有多少光波被吸收,就能得到每个样品孔的吸光度的值。
什么是S/P值?
这个吸光度值与抗体浓度存在一一对应的关系,因此只需要找到这个关系就可以把吸光度值转化成抗体的浓度值。
一种方法是,把阳性标准品做梯度稀释,然后把不同稀释浓度的吸光度值做一个标准曲线,然后拿样品的吸光度值去曲线上比对,就能够获得样品中抗体的浓度数值。
当然还有更简便的方法,即不做梯度稀释,直接用样品的吸光度值跟特定浓度的标准品吸光度值进行比对。这也就是S/P值方法。
S/P值是一个比值。即S——Sample样本的吸光度值,比,P——Positive阳性对照的吸光度值。下面是完整公式:
S/P = (样本值-阴性对照值)/(阳性对照值-阴性对照值)
所以,如果S/P ≥ 1 时,当然肯定是阳性,说明样本中抗体的浓度等于或超过了阳性对照的浓度。S/P的值越大,抗体浓度越高。
如果S/P<1,可能会稍微复杂一些,小于1说明样品中的抗体量小于阳性对照的量,但是少多少才算阴性?所以这个时候就需要用一个分界值来判定。这个分界值,一般需要厂家测量之后根据敏感度和特异度进行制定,比如多数厂家蓝耳病抗体的临界值设置为0.4,也就是当S/P < 0.4 则可以判定为阴性,如果S/P>0.4则判定为阳性。
主要参考来源:
https://www.immunology.org/public-information/bitesized-immunology/experimental-techniques/enzyme-linked-immunosorbent-assay
https://en.wikipedia.org/wiki/ELISA