猪场病料采集有多种类型,包括鼻拭子,口腔拭子,肛拭子,血液样及各类组织样,当前非瘟荧光PCR检测使用较多的是鼻拭子、口腔拭子及环境样拭子,猪场常规监测更多的是应用ELISA检测血液中抗体的变化,如果想做抗原检测会取内脏组织样做PCR检测或分离病毒细菌。采集不同类型的样品有着不同的方法及注意事项。
一、采样前物资准备
1. 一次性注射器(5mL ),10 毫升抗凝管,酒精棉球若干(采集血样)
2. 2mL 离心管,棉签(2 支/头),500mL 生理盐水(采集唾液)
3. 10mL 离心管,淋巴取样器(1 支/头),500mL 生理盐水,酒精棉球若干(采集淋巴)
4. 解剖刀柄(1 把),解剖刀片(1 包)(采集组织样品)
以上物资根据采样需要进行选择。
5. 一次性手套若干双,乳胶手套若干双,防护服若干套、水鞋(1 套/人), 保定绳(1 条/头),记号笔 1 支
6. 带冰袋采样泡沫箱/ 车载冰箱(1 个),3% 烧碱消毒桶(1 个),1 :200 卫可消毒桶(1 个),高于 70 度水温消毒桶(1 个),75% 酒精(500mL ),生石灰若干
二、常见病料的采集
1、常见病料的采集和保存注意事项
1.1采集病料要保证及时新鲜,选择临床症状典型的发病猪只,死前采用前腔静脉放血采样,如果是病死后猪只解剖采样最好死亡时间不超过6h。
1.2组织的选取:采集病变组织,每份组织单独用自封袋装,现场一般采集心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等,活体剖检。注意:操作人戴好一次性PE手套(保护自己,避免污染样品),佩戴口罩。组织采样尽量无菌操作(烧烙)。
1.3肠道内容物的采集,肠道选择特征明显的部分,将带有内容物的肠管两端用棉线结扎,从两端剪断;或用棉拭子插到直肠粘膜表面采集粪便;注意不要采现场抗生素治疗过的猪只。
1.4全血:凝固样品3-5毫升,不能冷冻保存,应该在2-8℃冷藏,保存时间以不超过3天为宜。全血样品时间过长,将会引起红细胞破裂,影响血清的提取,影响抗体效价。所以采集的病料应加足够的冰块放入保温箱中尽快安排送检。
1.5 血清:血清体积应大于1毫升,无严重溶血,澄明透亮,无胶冻样物质(限位栏饲喂的猪只,最好是空腹采血),采血后轻拿轻放,就地放置,待血液凝固方可移动。注意血清样品不合格,可能导致检测结果出现假阳性或者假阴性,使用1.5ml或者2ml的离心管装血清,不得使用10ml离心管、采血管等耗材装血清;分离好的血清使用油性记号笔标记样品编号,样品采集后应及时送检,血清样品在2~8℃保存不可超过2天,或在-20℃保存不超过30天,避免反复冻融。
1.6 粪便:需采集刚排出的新鲜粪便,样品用5 ml或10 ml离心管或干净的自封袋装,体积应大于3 ml,粪便不能装得过满。
1.7环境试子样的采集:
人员:用蘸有生理盐水的长棉签对人员及携带物品进行多点重复采样,包括头皮、指甲缝、鼻孔、鞋底、手机及物品外包装等。
车辆:用蘸有生理盐水的棉签对车体进行多点采样,包括驾驶室(地垫、方向盘)、车辆栏杆、轮胎、车厢,每个点采样面积应不低于50cm2
2、各种疾病脏器采集应遵循采集脏器含毒量高的原则。
2.1疑似猪瘟(HC):主要采集扁桃体、肺门淋巴结、脾脏、肾脏和全血。
2.2疑似猪繁殖与呼吸障碍综合症(PRRS):主要采集肺组织、血清、扁桃体、脾淋巴结、粪便,流产胎儿的脾肺,血清和胸水也是适宜的检验材料。
2.3疑似猪伪狂犬病(PRV):主要采集病猪脑组织和扁桃体;另外,鼻咽分泌物也可用于病毒分离。
2.4疑似猪口蹄疫(FMD):采集未破裂或刚破裂的水疱皮(液),对新发病死亡的动物可采取扁桃体、淋巴结组织等。
2.5疑似猪传染性胃肠炎(TGE):主要采集十二指肠、空肠及回肠的黏膜,在鼻腔、气管、肺的黏膜及扁桃体、粪便中也可分离到病毒。
2.6疑似猪流行性腹泻(PED):主要采集临床上发病12h没有治疗过的仔猪空肠及回肠段,至少采5头。两端以无菌棉线结扎后放到冰箱速冻24小时,然后以泡沫箱加冰块送实验室检查。每窝拉稀仔猪,用一根直肠棉拭子采3头即可。每个棉拭子独立包装,要求一窝一个包装。
三、检测和监测申请程序
中心实验室主要开展抗原检测(PED病原、蓝耳病原、非洲猪瘟病原)、抗体监测(猪瘟、蓝耳、伪狂gE、伪狂gB、口蹄疫O型等抗体)及药敏实验。
1、为方便实验室人员及时掌握检测需求、提升检测效率并及时反馈检测结果,各养殖公司送检病料及血清前需及时在钉钉上提交申请报告,走审批流程,第一审批人为各养殖公司总经理,第二审批人为兽医总监,第三审批人为事业部总经理,审批完成后,抄送转发兽医部中心化验室,化验室见审批报告方可安排试验。送检前请如实填写实验室送检申请表。
2、检测注意事项
2.1实验室送检申请表需认真填写,公司每个猪场,编号从公司名简称+2022-01开始,不得重复编号,便于实验室核对样品和及时进行检测。比如XX农牧一场送样,编号就从NM01-2022-01开始。
2.2样品需添加适当数量的冰袋,用泡沫箱装,保证运送途中到达实验室前冰袋没有完全融化;
2.3送检样品不合格,血清样品编号不清,不予检测。
2.4为便于实验室集中检测,各检测单位送样尽量安排在周一至周五上班时间。
2.5特殊情况下,紧急样品,当天收货,当天安排检测。但须电话提前沟通。